HIV & రెట్రో వైరస్ జర్నల్ అందరికి ప్రవేశం

నైరూప్య

మిడిల్ ఈస్ట్ రెస్పిరేటరీ సిండ్రోమ్ కరోనా వైరస్ (MERS-CoV) కోసం వైరస్ ఫుల్-లెంగ్త్ cDNA క్లోన్ ఏర్పాటు

ఝూ లాంగ్‌చావో

MERS-CoV ఇన్ఫెక్షియస్ క్లోన్ వైరస్ ప్రోటీన్ ఫంక్షన్ మరియు వైరస్-హోస్ట్ ఇంటరాక్షన్‌ను అధ్యయనం చేయడానికి ఒక ముఖ్యమైన వేదిక. ప్రస్తుత అధ్యయనంలో, వెరో సెల్ అడాప్టెడ్ MERS-CoV (MERS-CoV-HKU) యొక్క ఇన్ఫెక్షియస్ cDNA క్లోన్ క్లాస్ II పరిమితి సైట్ BsmBI ఆధారిత అతుకులు లేని క్లోన్ టెక్నాలజీతో రూపొందించబడింది. దాని జన్యువు 12 పక్కపక్కనే ఉన్న శకలాలు మరియు BsmBIతో చుట్టుముట్టబడిన PCR ద్వారా విస్తరించిన తరువాత ప్యానెల్‌గా విభజించబడింది. రెండు రౌండ్ల క్లోనింగ్‌తో ఎండోన్యూకలీస్ BsmBI జీర్ణం చేయడం ద్వారా ఏర్పడిన ప్రత్యేకమైన జంక్షన్‌లను ఉపయోగించి శకలాలు బ్యాక్టీరియా కృత్రిమ క్రోమోజోమ్‌లుగా (BAC) మరింత సమీకరించబడ్డాయి. జీనోమ్‌లోని రెండు BsmBI పరిమితి సైట్‌లు సైలెంట్ మ్యుటేషన్ ద్వారా తీసివేయబడ్డాయి మరియు icMERS-CoV-HKU యొక్క మాలిక్యులర్ మార్కర్‌గా సెట్ చేయబడ్డాయి. చివరగా, BACలో CMV ప్రమోటర్ దిగువన ఉన్న MERS-CoV-HKU యొక్క పూర్తి-నిడివి తిరిగి పొందబడింది.

వైల్డ్ టైప్ HCoV-EMC/2012 స్ట్రెయిన్‌తో పోల్చినప్పుడు, ఇన్ఫెక్షియస్ క్లోన్ ద్వారా కోలుకున్న MERS-CoV-HKU వెరో మరియు హుహ్7 కణాలపై అధిక టైటర్‌లను చూపించింది. జన్యు విశ్లేషణ ద్వారా, ఇది నాన్‌స్ట్రక్చరల్ ప్రోటీన్‌లు (nsp2, nsp3, nsp14, మరియు nsp16) మరియు స్ట్రక్చరల్ ప్రోటీన్‌లపై (స్పైక్, ORF5 మరియు N) జన్యు మార్పు కనుగొనబడింది. పర్యాయపద ఉత్పరివర్తనలు nsp2 (A2169C), nsp3 (C6172T, A6954G), nsp14 (C19514T), nsp16 (T21423G), S (A22367G, T24093A) మరియు, N249(T291)లో ఉంచబడ్డాయి. nsp3 (C6172T, A6954G), S (C25217T), మరియు N (A29574T)లో నాన్‌సైనమస్ మ్యుటేషన్‌లు కనుగొనబడ్డాయి, ఇది nsp3(T198I, D1702Y), S (S1251F), మరియు N (S1922)లో అమైనో ఆమ్లాల పరివర్తనకు దారితీస్తుంది. ఆశ్చర్యకరంగా, మూడు అమైనో ఆమ్లాలు 'SHY' చొప్పించడం మరియు నాలుగు న్యూక్లియోటైడ్లు 'TTTA' తొలగింపు వరుసగా S2 మరియు ORF5 ప్రాంతంలో కనుగొనబడ్డాయి.

మునుపటి అధ్యయనం ప్రకారం, BatCoV-HKU4 మరియు BatCoV-HKU25 యొక్క RBD మానవ DPP4 గ్రాహకాన్ని గుర్తించగలవు కానీ BatCoV-HKU5 యొక్క RBD గుర్తించలేకపోయింది. MERS-CoV మరియు BatCoVల మధ్య సంబంధాన్ని విశదీకరించడానికి, MERS-CoV ఇన్ఫెక్షియస్ క్లోన్ మరియు చిమెరిక్ MERS-CoV ఇన్ఫెక్షియస్ క్లోన్‌లు ఉత్పత్తి చేయబడ్డాయి, దీనిలో MERS RBD ప్రాంతం BatCoV-HKU4, BatCoV-HKU5 మరియు BatCoV-HKU2-HK ద్వారా భర్తీ చేయబడింది. రీకాంబినెంట్ MERS-CoV ఇన్ఫెక్షియస్ క్లోన్‌లు వెరో మరియు హుహ్7 సెల్ లైన్‌లపై దాని ప్రతిరూపాన్ని మరింతగా అంచనా వేయబడ్డాయి.

మా రీకాంబినెంట్ MERS-CoV ఇన్ఫెక్షియస్ క్లోన్, కరోనావైరస్ ఇంటర్‌స్పెసిస్ ట్రాన్స్‌మిషన్ మరియు పాథోజెనిసిస్‌ను అధ్యయనం చేయడంలో దాని కీలక పాత్రను చూపింది.